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血清總蛋白質的測定方法
2009-9-18
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血清總蛋白質的測定方法1、凱氏定氮法仍然是建立各個具體方法時采用的參考標準方法。2、雙縮脲比色法是目前首先推薦的蛋白質定量方法。方法操作簡便,雖然雙縮脲試劑有大同不異。其中酒石酸鉀納可以穩定在堿性溶液中的銅離子,含有碘化物作為抗氧化劑。雙縮脲反應生成的復合物其吸收峰為540nm。可采用*的標準牛血清白蛋白作為標準品,經稱量,必要時用凱氏定氮法標定。各地質控中心提供的混合標準血清可作為第二參考,血清用量100μl,在10-120g/L濃度范圍內呈良好線性關系,批內CV值3、染料...
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液氮罐使用注意事項
2009-9-16
2957
液氮罐的使用與保管需注意以下幾個方面:一、使用前的檢查液氮罐在充填液氮之前,首先要檢查外殼有無凹陷,真空排氣口是否完好。若被碰壞,真空度則會降低,嚴重時進氣不能保溫,這樣罐上部會結霜,液氮損耗大,失去繼續使用的價值。其次,檢查罐的內部,若有異物,必須取出,以防內膽被腐蝕。二、使用過程中的檢查使用過程中要經常檢查。可以用眼觀測也可以用手觸摸外殼,若發現外表掛霜,應停止使用;特別是頸管內壁附霜結冰時不宜用小刀去刮,以防頸管內壁受到破壞,造成真空不良,而是應將液氮取出,讓其自然融化...
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ELISA的概念、原理、操作步驟
2009-9-11
2651
ELISA的概念、原理、操作步驟ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來,發展十分迅速,目前已被廣泛用于生物學和醫學科學的許多領域。(一)原理ELISA是以免疫學反應為基礎,將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,...
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甲基化芯片在遺傳學中的應用
2009-9-9
2486
表觀遺傳改變可以定義為基因的遺傳性或獲得性改變,但是這種改變和DNA序列改變無關。DNA甲基化是zui為常見的表觀遺傳改變;啟動子或*外顯子CpG島中的甲基化改變將導致基因表達失活;組蛋白的化學修飾也可以作為表觀遺傳改變;組蛋白發生乙酰化改變的基因通常被開啟。CpG島的異常甲基化是導致基因沉默和過度表達的zui主要的改變,常規的方法不能在全基因組水平上對甲基化進行檢查。表觀遺傳分析與基因芯片技術結合起來則可以高通量進行甲基化的定性、定量分析。目前建立了2種基于芯片的甲基化分析...
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DNA的不同提取方法及比較
2009-9-7
3468
DNA的不同提取方法及比較傳統的DNA提取方法傳統的DNA提取與純化,如CTAB法、SDS法是在裂解細胞的基礎上,多次苯酚氯仿等有機溶劑抽提使蛋白質變性沉淀于有機相,而核酸保留在水相,達到分離核酸的目的;加入RNA酶除去核酸中的RNA;然后加入異丙醇、乙醇等沉淀DNA;用70%乙醇漂洗沉淀,除去分離過程中殘留的有機溶劑和鹽離子,以免影響核酸溶解和抑制后續步驟的酶促反應,zui后用TE溶解DNA備用。CTAB是一種陽離子去污劑,能與核酸形成復合物,此復合物在高鹽(0.7mol/...
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如何預防細胞培養的污染問題
2009-9-4
3350
體外培養的細胞受到嚴重污染時,有時即使想盡各種辦法也難以挽回。因此,防止污染,預防是關鍵。只有將預防措施貫穿于整個細胞培養的始終,才能將發生污染的可能性降到zui小程度。一般預防可從以下幾方面著手:1、從物品、用品消毒滅菌著手細胞培養所用物品清洗、消毒要*,各種溶液滅菌除菌要仔細,并在取樣檢菌一周后確認無菌才能使用。同時,在無菌過濾操作中,隨著濾過體積的增大,濾膜破損的可能性增加,故應選擇zui后過濾的液體進行檢測。定期對二氧化碳培養箱進行消毒。具體操作:75%的酒精搽拭培養...