細胞五分類技能及其運用發(fā)展
細胞分析儀是醫(yī)院臨床查驗運用十分廣泛的儀器之一,是指對必定體積內(nèi)血細胞數(shù)量及異質(zhì)性進行分析的儀器。20世紀9o年代以來,跟著電子技能、流式細胞技能、激光技能、電子計算機技能和新熒光化學(xué)物質(zhì)等各種高新技能在血細胞分析儀中的運用.使血細胞分析儀的檢測原理不斷完善、測量參數(shù)不斷增加、檢測水平不斷提高.尤其在白細胞五分類技能方面,已發(fā)展到使用多項技能(如射頻、細胞化學(xué)染色、流式細胞術(shù)和熒光染色技能等)聯(lián)合一起檢測一個白細胞.再用先進的計算機技能區(qū)別、辨別經(jīng)上述辦法處理后的各自細胞間的細胞不同.綜合分析實驗數(shù)據(jù),得出較為精確的白細胞分類成果。為臨床疾病的診斷、治療供給了重要的實驗室根據(jù)。近年來。能夠?qū)Π准毎M行五分類計數(shù)的血細胞分析儀現(xiàn)已普遍運用。本文就現(xiàn)在血細胞五分類測定中常用技能及其運用發(fā)展作一綜述。
1 細胞五分類技能的原理
1. 流式細胞術(shù)
流式細胞術(shù)(flow cytometry,F(xiàn)CM)是一種綜合運用光學(xué)、機械學(xué)、流體力學(xué)、電子計算機、細胞生物學(xué)、分子免疫學(xué)等學(xué)科技能,使被測溶液流經(jīng)測量區(qū)域,并逐個檢測其間每一個細胞的物理和化學(xué)特性,從而對高速活動的細胞或亞細胞進行快速定量測定和分析的辦法。
首先,待測細胞經(jīng)處理或染色后被壓人活動室,與此一起,不含細胞的緩沖液在高壓下從鞘液管噴出,鞘液管人口方向與待測樣品流成必定視點,這樣鞘液就能被包繞著樣品高速活動,組成一個圓形的流束,待測細胞在包繞下單行擺放,順次經(jīng)過檢測區(qū)域.在激光束的照射下發(fā)生散射光和激起熒光。這兩個光源信號分別反映了細胞體積的巨細和內(nèi)部的信息.經(jīng)光電倍增管接納后可轉(zhuǎn)換為電信號,再經(jīng)過模,數(shù)轉(zhuǎn)換器.將接連的電信號轉(zhuǎn)換為可被計算機識別的數(shù)字信號,經(jīng)計算機處理,可將分析成果顯示在屏幕上。
為了確保細胞單個擺放地逐個經(jīng)過檢測區(qū)域,鞘流技能在流式細胞術(shù)中被廣泛運用。根據(jù)層流理論,因為兩種液體的流速和壓力不同。在必定條件下樣品溶液與包裹它的鞘液在活動中能夠保持彼此分離并且同軸。一起鞘液流能夠加快樣品溶液中顆粒的活動并迫使他們的活動軌道保持在液流的中軸線上,使細胞單擺放地逐個經(jīng)過檢測區(qū)域,這便是所謂的液流聚集原理
2.阻抗法
根據(jù)庫爾特原理,將不良導(dǎo)體血液按必定份額稀釋于等滲的電解液中,在小孔電極的兩側(cè)加一恒流源.在負壓效果下,使稀釋的血細胞經(jīng)過小孔。當(dāng)細胞經(jīng)過截面時會因為電阻增大發(fā)生相應(yīng)的脈沖,其脈沖的幅度與細胞的體積成正比,脈沖的頻度與細胞的數(shù)量成正比。這便是的庫爾特原理或稱變阻脈沖原理。使用庫爾特原理能夠有效地區(qū)別淋巴及單核細胞。
3. 激光散射法/多視點偏振光散射技能
根據(jù)光散射理論,當(dāng)激光照射到活動室內(nèi)流過的每一個細胞時,因為細胞的物理特性,部分光線從細胞上經(jīng)不同的視點散射。其間,前向小視點散射光的光強能夠反響細胞體積;大視點散射光的光強能夠反響細胞核,漿復(fù)雜度和細胞顆粒的信息;而側(cè)向散射光的光強能夠反響細胞膜、核膜、細胞質(zhì)的變化。因而,能夠根據(jù)細胞表明光散射的特色對細胞進行分類。用激光光源發(fā)生的單色光束直接進入計數(shù)池的敏感區(qū),在不同視點(10度~7O度)對每個細胞進行掃描分析,測定其散射光強度,從而供給細胞結(jié)構(gòu)、形態(tài)的光散射信息。因為粗顆粒細胞的散射強度比細顆粒細胞更強,故光散射對細胞顆粒的構(gòu)型和顆粒質(zhì)量具有很好的區(qū)別能力。
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